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但是，以1942年6月日军在中途岛海战失败为转机，战局日益不利，从瓜达尔卡纳尔岛攻防战失败并从该岛撤退开始，失去了制海和制空权。实施“跳蛙作战”的美澳联军和进行阻击的日军，在中部所罗门群岛展开了激烈的战斗。
在这种情况下，在日军驻腊包尔要塞的官兵中发生了“一氧化碳中毒致死事件”。腊包尔位于西太平洋俾斯麦群岛、新不列颠岛（新几内亚所属）的东北部，当时是个军事要地。
日军在腊包尔构筑了坚固的要塞，从这里可以炮击经过附近的美军舰船和飞机。但是，从这个用水泥构筑的永久性的半地下式的要塞连续发射大炮和用机关枪射击，使要塞内产生并充满了一氧化碳。
一氧化碳是一种无色无味的气体，它在空气中含量增加到四万分之一时，人会感到头痛而影响人体的健康。这是因为一氧化碳和血液中血红蛋白相结合，氧气便不能进入人体内，引起严重缺氧。
腊包尔要塞里的官兵开始频繁地发生一氧化碳中毒事件。由于一氧化碳很轻，浮游在大气之中。当人们察觉时，浓度就很高了。由于它伤害人的脑细胞，常常使人失去知觉，甚至死亡。
当时的大本营（后改称为最高战争指导会议）十分重视腊包尔要塞的中毒事故，指令516部队和731部队共同研究一氧化碳中毒的原因，并提出防止中毒的对策。于是516部队经常秘密派出五六名人员到731部队去工作。据说，516部队首次到达平房的时间是1943年6月1日，一直在那里工作到同年9月1日；第二次是1944年6月1日至9月1日；第三次是1945年6月1曰至战争结束。先后共派遣三次。
这些研制毒气的人员抵达731部队以后，731部队对他们的身份严格保密。731部队安排他们住在高级军官宿舍里，宛如731部队人员一样。除731部队的部分领导干部外，其他人员至今根本不知道这件事。
516部队和731部队的联合研究：1943年进行了一氧化碳及芥子气对人体影响的研究；1944年进行了芥子气的若干实验以及“茶”一号（氰酸）的研究；20年来进行了氰酸对人体的实验。
当时研制出了氮芥子气这种残留效果很高的毒气，并进行数次实验。
另外还进行过在棒球那么大的玻璃球里填满氰酸的“攻击坦克用的茶弹”的研究。这是一种按照火焰瓶投掷要领将“茶弹”投入坦克炮塔杀伤内部乘员的原始武器。
“1943年秋，在诺门坎进行过极大规模的氰酸实验。这次实验是由25师团师团长直接领导，在下风处部署了猴、马、鸟、兔等实验用的动物，喷射了压缩在像灯油桶似的一桶约一公斤氰酸。当时没有使用人做实验。”
“当时，陆军十分重视把氰酸作为武器来使用。但是，氰酸武器致命的缺陷是挥发性太强，沸点只有25℃～26℃，夏季十分容易气化；经皮肤吸收很快，使用起来也就非常危险；另外，同空气相比，它的比重仅0。7，很容易从地表面蒸发掉。
“因此，必须在日出、日落等地面垂直温度‘上温下冷’现象发生逆转的时间带内来进行实验，作为武器来说，是不完善的，所以没有使用。516部队储藏了大量未使用的‘茶弹’。战争结束撤退时，在嫩江河畔烧毁了一些，装在高压钢瓶内的氰酸和芥子气都扔进了嫩江。人们都担心一旦那些钢瓶烂掉，是否会成为污染源。”原516部队人员作证时担心地说道。
出现在“马鲁太”小屋外走廊的那两个毒气部队人员，开始时在单人牢房前停了下来，从“窥视窗”观察牢内的动静。在这间狭小的牢房里关着4名“马鲁太”。
由于是夏季，有的“马鲁太”上半身接近裸体，他们坐在地上，似乎在秘密交谈着。
这两名516部队人员从自由开关的“窥视窗”观察了一会儿，立即迅速地从袋中取出装有氰酸液化气的三角形长颈瓶，投进了牢房。长颈瓶发出摔碎声的同时，“马鲁太”们大声喊叫道：“毒气！快逃！”牢房为之骚然。
516部队人员的长靴发出响声，从一间单人牢房走向另一间牢房，相继打开“窥视窗”，把三角形长颈瓶扔了进去。长颈瓶被摔碎以后，气化了的氰酸气在单人牢房内迅猛地扩散开来，充满了房内。
整个“7号楼”立即变成了一座充满惨叫声的活地狱。有的“马鲁太”口里吐着白沫，显然憋得十分难受；有的“马鲁太”把脸贴在地上蹭来蹭去，想躲开毒气；有的“马鲁太”往同伴的尸体底下钻；有的“马鲁太”在临终的痛苦中，用系着手铐的锁链，使出全身的力气拼命敲打“窥视窗”，直到气尽力竭才倒下去。
原516部队人员回忆道：“投掷三角形长颈瓶作业，大约在15分钟内就结束了。据通知，处理‘马鲁太’是731部队撤退准备工作的第一个步骤。我记得，一共投进去9个三角形长颈瓶……似乎有的单人牢房里没有人，是空的。各牢房死的人约三四个人以上。不过，有的不是马上就死去，发出一声声痛苦的惨叫，不停地从里面敲打铁门……放在口字楼顶上那个装‘茶’的钢瓶，是在战争结束前镇压‘马鲁太’暴动时用剩的……
在第一集中曾写到那里有利用换气系统施放毒气的装置。为什么不利用这一系统，而让我们冒着危险，把氰酸灌进三角形长颈瓶后投入牢房呢？这一点我们始终未弄清楚。我想大概是没有注入毒气的系统吧。另外为什么不用枪杀，也是一个疑问。
“据我的推测，在731部队里用尽一切手段处理‘马鲁太’之后，可能委托516部队来做‘最后的处理’。如果使用枪杀，因为‘窥视窗’太小，死角太多；要是把毒物混入食物送进去，有的‘马鲁太’会不吃，也不会自杀。由于这种种考虑，所以最后才让我们来做‘马鲁太’的善后处理吧！
“我们是8月10日上午10时左右抵达731部队的，在单人牢房里，镶有玻璃的杂居牢房里巳经有不少上吊身亡的俘虏尸体，多半是妇女。我记不清是否向7号楼、8号楼的所有牢房都投过三角形长颈瓶，而只记得向那一栋楼的一侧投过，为什么只向一侧投毒，我不明白。我们在731部队撤退时，曾经进行过挖坑埋许多死尸的作业。从以上情况看，估计在我们抵达731部队之前已处理了相当多的‘马鲁太’。”
走向死亡的斗室
在731部队的许多作恶行为中最惨不忍睹的活体实验，要算是和516部队联合进行的毒气实验了。
在平房731部队总部设施的西北方向约4公里洼地上，有一块用苇席和部分砖头围起来的地方。它的周围是极目无垠的荒野。由于这个小小的庭院是用苇席和砖墙围起来的，从远处看去，只是一个普通的仓库。
但是，这片洼地却正是堪称恶魔宴会的毒气实验场。
当时陆军拥有数种毒气和毒气弹：
黄一号 芥子气
黄二号 路易士毒气
茶 氰酸
蓝色 碳酰氯
红色 联笨氰基胂
芥子气，是一种糜烂性毒气，有些和做豆腐杂烩等作为调料的芥末所发出的臭味相似。人们的皮肤一沾着这种毒气，就像烧伤那样，先起水泡后溃疡，外露的手脚、脸部、脖子不消说，它还可浸透衣服，弥漫全身，直至全身烂透。
路易士毒气是速效性糜烂毒气。它可以渗入人的视神经或皮肤里，还能伤害肺部和咽喉，引起呼吸困难。死亡时的惨状，令人不忍一睹。
氰酸气，有些像苦杏仁那样味道，吸入体内立即会同血液中蛋白质相融合，使人陷入缺氧状态。它是一种中毒性气体。纳粹德国在奥斯威辛（集中营）曾大量使用过这种毒气。
碳酰氯和联苯氰基胂（氯化砷）都是一种刺激性的毒气。前者能使人窒息而死；后者具有催泪性。“红色”的毒性较小，常常用于毒气演习。
516部队内的毒气防护实验，着眼于人对毒气能“持续”多久，它是在戴或不戴防毒面具时，在面具内的活性炭和氧化剂的量发生变化或毒气种类和浓度发生不同变化的情况下，人究竟能“持续”多久的一种实验。这种实验使用了许多“马鲁太”，三年间可能使用了100多人。
“参加这些实验的人员，首先是现役人员，其次是要提拔干部候补生的预备役人员。516部队在当时的日军部队中，民主气氛较浓。在队员中有一位毕业于大阪大学的叫S·Y的技术中尉，在N部队长命令他参加实验时，他表示了拒绝，说自己是天生教徒，不能参加那种不人道的实验。虽说是民主气氛较浓的部队，但是，在天皇的军队中，S中尉根据自己的信仰拒绝执行上级的命令，是很了不起的。容忍他这种态度的部队长也是很了不起的。战争结束撤退时部队长指挥得当，我能平安无事地回到国内也是托了他的福。这位部队长现在业巳去世。”
731部队的毒气实验，主要在夏天进行。因为这种实验必须利用广阔的荒野。如果放在冬季，在严寒条件下，是不可能进行野外实验的。
用来作毒气实验的“马鲁太”多数都已做过各种实验，身体机能已经遭到损坏。
“和516部队关系最密切的是731部队的吉村班。因为往往是吉村班在冻伤实验中使用过的‘马鲁太’，再送到毒气实验场去。……从吉村班转送来的‘马鲁太’是十分惨的：多数烂掉了手脚，光剩下像海豹一样的躯体；有的由于营养不足，全身只剩下皮包骨头，腿肚子只有手腕那么细。我想，可能是把进行冻伤实验后巳经没有用处的‘马鲁太’转送过来的。”
原516部队人员以一种充满苦涩的口吻做出了上述证词。这完全是把“马鲁太”彻底利用到底的一种凄惨的“废物利用”。516部队置于承包731部队（废物）的位置。
一位原516部队人员把自己的证词录了音送来。他在录音最后说：“战争是狂人干的勾当，绝不能让它重演。因此，挖掘出那些不堪回首的往事是为了告诉不了解战争的下一代人。”
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